重組蛋白可在大腸細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等體系中得到高效表達,其表達形式一般可分為:①細胞外的分泌表達;②細胞內可溶性表達;③細胞內不溶性表達,即產物以包涵體的形式存在。菌體重組蛋白的提取,包括細胞破碎、...[繼續閱讀]

    真菌是一類種類繁多、結構多樣的生物,從單細胞的酵母菌到高度分化的直徑大于1m的大型真菌。真菌中含有大量的蛋白質,其中蘑菇中蛋白質含量占到其干重的31%。因此真菌蛋白質的提取,其來源比較廣泛。而且真菌中的一些酶和人類...[繼續閱讀]

    細胞由細胞膜、細胞核和細胞質組成,而細胞質中含有的若干細胞器和細胞骨架等,稱為亞細胞組分。當要提取的蛋白質存在于亞細胞組分中時,首先要提取亞細胞組分,再提取其中的目標蛋白質,這樣可以防止其他細胞組分中的物質對目...[繼續閱讀]

    植物細胞除了含有與動物細胞一樣的細胞器,如細胞核、線粒體、核糖體、內質網外,還有動物細胞沒有的葉綠體。因此,也和動物細胞一樣,如果要分離制備分布在這些細胞器中的蛋白質,為了防止其他細胞組分中的物質對目的蛋白的干...[繼續閱讀]

    當需要提取的酶存在于富含酚及酚類化合物的植物綠葉、水果和蔬菜組織時,必須除去酚及酚類化合物,否則會影響后面的提取分離工作。酚類化合物在完整的組織和細胞中是不被氧化的,但是當組織破損時,酚類化合物在PPO、單酚氧化...[繼續閱讀]

    沉淀是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。沉淀法因其具有簡單、經濟和濃縮倍數高的優點,而成為分離純化蛋白質和酶的常用方法之一。通過沉淀,將目的蛋白質轉入固相沉淀或留在液相,而與雜質得到初步的分離。此方法的...[繼續閱讀]

    (一)基本原理蛋白質等生物大分子物質在水溶液中以一種親水膠體形式存在,無外界影響時,呈穩定的分散狀態(如圖3-1)。其主要有兩個原因:一是蛋白質為兩性物質,在一定pH條件下呈現一定的帶電性,因而在水溶液中會因靜電作用而相互...[繼續閱讀]

    向水溶液中加入一定量親水性的有機溶劑,降低溶質的溶解度,使其沉淀析出的分離純化方法,稱為有機溶劑沉淀法。其機理主要有:①親水性有機溶劑加入溶液后降低了介質的介電常數,使溶質分子之間的靜電引力增加,聚集形成沉淀;②...[繼續閱讀]

    等電點沉淀的原理:兩性電解質在溶液pH處于等電點(pI)時,分子表面靜電荷為零,導致賴以穩定的雙電層及水化膜的削弱或破壞,分子間引力增加,溶解度降低,從而相互聚集,沉淀析出。利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩定...[繼續閱讀]

    將親和試劑加入到含有靶蛋白的混合溶液中,就可以形成親和配體-靶蛋白的共聚物。這種共聚物可以在一定條件下形成沉淀,通過過濾或離心的方式進行分離,然后將酶或蛋白質從親和配體-聚合物上解離下來。這一過程類似于蛋白質的...[繼續閱讀]